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本文標題:細胞免疫染色法,了解細胞內胞器的分布情形

信息分類:技術資訊 新聞來源:未知 發布時間:2012-9-12 0:14:43
實驗結果
一、 利用細胞免疫染色法,了解細胞內胞器的分布情形。
我們使用Hochest 33258此種螢光物質與DNA結合發出藍色螢光,可以指示細胞核所在的位置。接著加入會辨識Golgin-245(一種已知會位于哺乳動物細胞內高基氏體的蛋白質)的抗體,以及具有綠色螢光物質標定的二級抗體進行免疫染色作用。我們觀察到細胞中有綠色螢光訊息的區域,得知高基氏體這種胞器所在的位置。
二、CTB-594 nm的內胞作用。
為了觀察細胞的內胞作用,我們以會激發出紅光的CTB-594 nm分子(一種會被細胞經內胞作用而運送至高基氏體的毒蛋白質)與活細胞作用30分鐘后,發現CTB-594 nm (紅光) 會與標示高基氏體的Golgin-245 (綠光) 訊號重疊,表示CTB-594 nm分子的確會被運送至高基氏體,由此可以得知內胞作用的存在。
三、Tf-488 nm的內胞作用。
為了觀察細胞的內胞作用,我們以會激發出綠光的Tf-488 nm分子(一種會被細胞經內胞作用而運送至高基氏體的運輸蛋白質)與活細胞作用30分鐘后,發現Tf-488 (綠光) 會與標示高基氏體的Golgin-245 (紅光) 訊號重疊,表示Tf-488 nm分子的確會被運送至高基氏體,由此可以得知內胞作用的存在。(因Tf-488 nm被激發后會發出綠光,所以我們改用會被激發出紅光的Golgin-245來作為高基氏體的標示物)。
四、VSVG-GFP的外釋作用。
我們利用VSVG-GFP(一種病毒醣蛋白質與綠色螢光蛋白質結合的分子)來觀察此種蛋白質在細胞內的運輸過程,實驗結果顯示綠色的螢光物質散佈在細胞膜及細胞間質中,由此可知VSVG-GFP在內質網合成并運送至高基氏體后,會再運送至細胞膜。
五、蛋白質運送的調節作用。
我們已知ARL1這種分子會調節蛋白質的運輸作用,所以運用轉染的方式讓細胞同時大量表現ARL1突變株 (ARL1QL) 、VSVG-GFP (綠色),觀察在有ARL1QL存在時,VSVG-GFP將無法順利地輸送至細胞膜上,轉而堆積在高基氏體中。

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